Биолабмикс

Ингибиторы контрольных точек (анти-PD-1, анти-CTLA-4) изменили лечение меланомы, но у значительной части пациентов терапия не работает, а предугадать это заранее сложно. Российские учёные из Приволжского исследовательского медицинского университета предложили элегантное решение: брать лимфоциты пациента ещё до начала терапии, обрабатывать их антителами в пробирке и смотреть на изменения свечения кофермента NAD(P)H с помощью FLIM-микроскопии.

Оказалось, что у "отвечающих" клеток растут два конкретных параметра свечения (α1 и τ2), связанные с переключением метаболизма на более активный гликолиз, цикл Кребса и биогенез митохондрий — а у пациентов, чья болезнь позже прогрессировала, эти же параметры, наоборот, снижались. На выборке из 22 пациентов реакция клеток in vitro совпала с реальным клиническим исходом через 4–6 месяцев — то есть метод в перспективе может подсказывать врачу, стоит ли назначать иммунотерапию, ещё до её начала.

Атеросклероз долго изучали как проблему "плохого холестерина", но всё активнее говорят о роли клеточного стресса. Команда из Петровского научного центра хирургии и Института общей патологии и патофизиологии с помощью CRISPR/Cas9 "выключила" ген IRE1α — один из сенсоров стресса эндоплазматического ретикулума — в моноцитах линии THP-1.

Результат впечатляет: без IRE1α клетки почти не реагируют на бактериальный липополисахарид (LPS) — выработка провоспалительных цитокинов TNF, IL-1β и IL-6 резко падает. Но самое интересное — эффект не ограничился воспалением: макрофаги без IRE1α перестали активно захватывать "плохие" липопротеины низкой плотности и формировать пенистые клетки (тот самый первый шаг образования атеросклеротической бляшки), потому что у них не включались гены-транспортёры CD36 и ABCA1. Получается, что один белок одновременно "дирижирует" и воспалением, и накоплением липидов — а значит, потенциально может стать точкой приложения будущих лекарств.

Один переключатель — два процесса под контролем. Кстати, экспрессию генов тут мерили с помощью БиоМастер HS-qPCR Hi-ROX SYBR (2×) — нашей смеси для qPCR.

Самая смелая история — про редактирование не ядерного, а митохондриального генома. При синдроме NARP (нейропатия, атаксия, пигментный ретинит) причина — мутация m.8993T>G в гене MT-ATP6, причем в клетке одновременно находятся и мутантные, и нормальные митохондриальные ДНК (явление гетероплазмии). Ученые использовали технологию CRISPR-Cas9 и смогли получить линии клеток со стабильной экспрессией "mitoCas9". За 6 дней доля мутантной ДНК упала на 16-20%.

Чистоту клеточных линий и число копий ДНК проверяли наборами БиоМастер HS-qPCR SYBR Blue(2×) и Myco-визор — да, тоже нашими.